Resumo Objetivo Analisar o efeito da talidomida na progressão de lesões endometrióticas induzidas experimentalmente em ratas e caracterizar o padrão de proliferação celular pela marcação imunohistoquímica de Antígeno Nuclear de Célula Proliferativa (PCNA) no endométrio eutópico e ectópico. Métodos Quinze ratas Wistar foram submetidas a laparotomia para indução de endometriose por ressecção de um corno uterino, isolamento do endométrio e fixação de um segmento do tecido ao peritônio pélvico. Após quatro semanas, os animais foram divididos em 3 grupos: controle (I), 10 mg/kg/dia (II) e 1 mg/kg/dia (III) de talidomida intraperitoneal por um período de 10 dias. As lesões foram resseccionadas juntamente com o corno uterino oposto para análise da glândula endometrial e do estroma. O tecido endometrial eutópico e ectópico foi submetido à imunohistoquímica para análise da proliferação celular por marcação com PCNA e o índice de proliferação celular (CPI) foi calculado como o número de células marcadas por 1.000 células. Resultados O grupo I apresentou média de CPI de 0,248 ± 0,0513 na glândula e de 0,178 ± 0,046 no estroma. Em contraste, os grupos II e III apresentaram CPI significativamentemenor, isto é, 0,088 ± 0,009 e 0,080 ± 0,021 para a glândula (p < 0,001) e 0,0945 ± 0,0066 e 0,075 ± 0,018 para o estroma (p < 0,001), respectivamente. Além disso, a área de lesãomédia do Grupo I foi de 69,2mm2, valor significativamentemaior em relação ao Grupo II (49,4mm2, p = 0,023) e Grupo III (48,6mm2, p = 0,006). Não houve diferença estatisticamente significante entre os Grupos II e III. Conclusão A talidomida mostrou-se eficaz na redução da área da lesão e CPI dos implantes de endometriose experimental tanto na dose de 1mg/kg/dia quanto na dose de 10 mg/kg/dia.

Abstract Objective To analyze the effect of thalidomide on the progression of endometriotic lesions experimentally induced in rats and to characterize the pattern of cell proliferation by immunohistochemical Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA) labeling of eutopic and ectopic endometrium. Methods Fifteen female Wistar rats underwent laparotomy for endometriosis induction by resection of one uterine horn, isolation of the endometrium and fixation of a tissue segment to the pelvic peritoneum. Four weeks after, the animals were divided into 3 groups: control (I), 10mg/kg/day (II) and 1mg/kg/day (III) intraperitoneal thalidomide for 10 days. The lesion was excised together with the opposite uterine horn for endometrial gland and stroma analysis. Eutopic and ectopic endometrial tissue was submitted to immunohistochemistry for analysis of cell proliferation by PCNA labeling and the cell proliferation index (CPI) was calculated as the number of labeled cells per 1,000 cells. Results Group I showed a mean CPI of 0.248 ± 0.0513 in the gland and of 0.178 ± 0.046 in the stroma. In contrast, Groups II and III showed a significantly lower CPI, that is, 0.088 ± 0.009 and 0.080 ± 0.021 for the gland (p < 0.001) and 0.0945 ± 0.0066 and 0.075 ± 0.018 for the stroma (p < 0.001), respectively. Also, the mean lesion area of Group I was 69.2mm2, a significantly higher value compared with Group II (49.4mm2, p = 0.023) and Group III (48.6mm2, p = 0.006). No significant difference was observed between Groups II and III. Conclusion Thalidomide proved to be effective in reducing the lesion area and CPI of the experimental endometriosis implants both at the dose of 1mg/kg/day and at the dose of 10 mg/kg/day.

Resumo Objetivo Caracterizar o padrão de diferenciação celular, proliferação e invasão tecidual em endométrio eutópico e ectópico de coelhas com lesões de endometriose induzidas por um modelo experimental 4 e 8 semanas após o procedimento de implantação endometrial. Métodos Vinte e nove coelhas fêmeas Nova Zelândia foram submetidas a laparotomia para indução de endometriose através da ressecção de um dos cornos uterinos, isolamento do endométrio e fixação do tecido no peritônio pélvico. Dois grupos de animais (14 animais em um grupo e 15 animais no outro) foram sacrificados 4 e 8 semanas após a indução da endometriose. A lesão foi excisada junto com o corno uterino contralateral para determinação da presença de glândulas e de estroma endometrial. Reações de imunohistoquímica foram realizadas no tecido endometrial eutópico e ectópico para análise dos seguintes marcadores: metaloprotease (MMP9) e inibidor tecidual da metaloprotease 2 (TIMP-2), os quais estão envolvidos na capacidade de invasão do tecido endometrial; e metalotioneina (MT) e p63, os quais estão envolvidos na diferenciação e proliferação celular. Resultados A intensidade da imunomarcação para MMP9, TIMP-2, MT e p63 foi mais alta nos endométrios ectópicos do que nos endométrios eutópicos. Contudo, quando as lesões foram comparadas entre 4 e 8 semanas, nenhuma diferença foi observada, com exceção do marcador p63, o qual foi mais evidente depois de 8 semanas de evolução do tecido endometrial ectópico. Conclusão Lesões endometriais ectópicas parecem expressar maior poder de diferenciação celular e de invasão tecidual comparadas com endométrios eutópicos, demonstrando o potencial de invasão, de progressão e de apresentação heterogênea da endometriose.

Abstract Objective To characterize the patterns of cell differentiation, proliferation, and tissue invasion in eutopic and ectopic endometrium of rabbits with induced endometriotic lesions via a well- known experimental model, 4 and 8 weeks after the endometrial implantation procedure. Methods Twenty-nine female New Zealand rabbits underwent laparotomy for endometriosis induction through the resection of one uterine horn, isolation of the endometrium, and fixation of tissue segment to the pelvic peritoneum. Two groups of animals (one with 14 animals, and the other with15) were sacrificed 4 and 8 weeks after endometriosis induction. The lesion was excised along with the opposite uterine horn for endometrial gland and stroma determination. Immunohistochemical reactions were performed in eutopic and ectopic endometrial tissues for analysis of the following markers: metalloprotease (MMP-9) and tissue inhibitor of metalloprotease (TIMP-2), which are involved in the invasive capacity of the endometrial tissue; and metallothionein (MT) and p63, which are involved in cell differentiation and proliferation. Results The intensity of the immunostaining for MMP9, TIMP-2, MT, and p63 was higher in ectopic endometria than in eutopic endometria. However, when the ectopic lesions were compared at 4 and 8 weeks, no significant difference was observed, with the exception of the marker p63, which was more evident after 8 weeks of evolution of the ectopic endometrial tissue. Conclusion Ectopic endometrial lesions seem to express greater power for cell differentiation and tissue invasion, compared with eutopic endometria, demonstrating a potentially invasive, progressive, and heterogeneous presentation of endometriosis.

INTRODUÇÃO: células-tronco podem originar e perpetuar o crescimento tumoral, porém são pouco conhecidas na gliomagênese. As metalotioneínas (MTs) são proteínas envolvidas na oncogênese, e sua a imunopositividade pode ser utilizada como marcador de mutação de células-tronco. Objetivo: estudar a expressão de MT no modelo experimental da ENU e estabelecer um modelo experimental para monitorar as células-tronco glioma na oncogênese. MÉTODOS: Trinta e seis ratos machos da raça Wistar foram divididos em dois grupos; o grupo de animais experimental foi tratado dentro de 24 horas após o nascimento (ratos neonatos) com uma dose única de N-etil N-nitrosoureia (ENU) (40 mg/kg). Nos animais do grupo controle, injetou-se o mesmo volume de solução salina. Os animais do grupo experimental foram subdivididos em três grupos de acordo com o tempo da eutanásia, como se segue: o Grupo 1 (G1) sofreu eutanásia com a idade de 30 dias; o Grupo 2 (G2), com 180 dias e o Grupo 3 (G3) sofreu eutanásia logo após o surgimento de sinais de existência de tumor do sistema nervoso, com uma média de idade de 321 dias. A detecção imunohistoquímica da proteína MT em cortes da medula espinhal fixadas em acetona fria e embebidas em parafina foi realizada pelo método do complexo streptavidina-avidina-biotina-imuno peroxidase. RESULTADOS: por meio de modelos experimentais de gliomagenese induzida pela N-etil N-nitrosoureia, foi possível detectar células-tronco de tumor putativo no início da oncogênese, analisar um processo de cancerização de campo e observar uma relação morfológica entre células positivas para MT e vasos sanguíneos. CONCLUSÕES: este modelo experimental reprodutível permite outros estudos sobre a origem, desenvolvimento e fatores reguladores da gliomatogênese.

INTRODUCTION: stem cells may originate and perpetuate the tumor growth, but they are poorly known in gliomagenesis. Metallothioneins (MTs) are proteins involved in oncogenesis and immunopositivity, for MT may be used as a stem cell mutation marker. OBJECTIVE: to study the MT expression in the ENU experimental model and to establish an experimental model to track glioma stem cells in early oncogenesis. METHODS: Thirty-six male Wistar rats were divided into two groups; the experimental group was treated within 24 hours after birth (neonate rats) with a single dose of subcutaneously injected N-ethyl N-nitrosourea ENU (40 mg/kg body weight). The control animals were injected with the same volume of saline. These experimental animals were subdivided into three groups according to the euthanize time, as follows: the Group 1 (G1) was euthanized at the age of 30 days; the Group 2 (G2), at the age of 180 days and the Group 3 (G3) was euthanized soon after the appearing of signs of the existence of nervous system tumors, at an average age of 321 days. Immunohistochemical detection of MT protein in cold acetone-fixed paraffin embedded spine cord sections was performed by the streptavidin-avidin-biotin-immuno peroxidase complex method. RESULTS: by using the experimental model of gliomagenesis induced by the N-ethyl N-nitrosourea, it was possible to detect putative tumor stem cells in early oncogenesis, to analyze a field cancerization process and to observe a close morphological relationship between MT positive cells and blood vessels. CONCLUSIONS: this reproducible experimental model allows further studies on the origins, development and regulating factors involved in gliomagenesis.

INTRODUCCIÓN: células madre pueden originar y perpetuar el crecimiento tumoral, sin embargo son poco conocidas en la gliomagénesis. Las metalotioneínas (MTs) son proteínas involucradas en la oncogénesis, y la inmunopositividad de las MTs puede ser utilizada como marcador de mutación de las células madres. Objetivo: estudio de la expresión de MT en el modelo experimental de la N-etil N-nitrosoureia (ENU) y establecer un modelo experimental para el seguimiento de las células madre en la oncogénesis glioma. MÉTODOS: treinta y seis ratas machos Wistar fueron divididas en dos grupos, un grupo de animales experimentales fue tratado dentro de 24 horas después del nacimiento (ratas neonatas) con una dosis única de ENU (40 mg/kg). Los animales del Grupo Control fueron inyectados con el mismo volumen de solución salina. Los animales del Grupo Experimental fueron subdivididos en tres grupos de acuerdo con el tiempo de eutanasia, así como sigue: el Grupo G1 sufrió eutanasia con la edad de 30 días; el Grupo G2, con 180 días y el Grupo G3, después del surgimiento de señales de existencia de tumor del sistema nervioso, con un promedio de edad de 321 días. La detección inmunohistoquímica de la proteína MT en cortes de médula espinal fijados en acetona fría y embebidos en parafina fue realizada por el método del complejo estreptovidina-avidina-biotina-inmuno peroxidase. RESULTADOS: por medio de modelos experimentales de gliomagénesis inducida por la ENU fue observado que es posible detectar células madre de tumor putativo en el inicio de la oncogénesis, para realizar un proceso de cancerización de campo y observar una relación morfológica entre células positivas para MT y vasos sanguíneos. CONCLUSIÓN: este modelo experimental reproductible permite otros estudios involucrando el origen, desarrollo y factores reguladores de la gliomatogénesis.